核酸蛋白測(cè)定儀是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中用于快速定量核酸（DNA/RNA）和蛋白質(zhì)濃度的關(guān)鍵設(shè)備。正確的操作不僅能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，還能延長(zhǎng)儀器壽命。本文將為實(shí)驗(yàn)室新手介紹核酸蛋白測(cè)定儀的基本操作規(guī)范、常見(jiàn)問(wèn)題及實(shí)用技巧。
一、操作前的準(zhǔn)備工作
1.儀器校準(zhǔn)
-空白校準(zhǔn)：每次使用前，需用超純水或緩沖液（如TE緩沖液）進(jìn)行空白校準(zhǔn)，以消除背景干擾。
-定期維護(hù)：若儀器長(zhǎng)時(shí)間未使用，需重新校準(zhǔn)，并檢查光源、檢測(cè)器是否正常。
2.樣品準(zhǔn)備
-核酸樣品：確保無(wú)顆粒物或雜質(zhì)，必要時(shí)進(jìn)行離心（12,000rpm，1-2分鐘）去除雜質(zhì)。
-蛋白質(zhì)樣品：避免高濃度去污劑（如SDS），以防影響吸光度檢測(cè)。
3.選擇合適的檢測(cè)模式
-紫外吸收法（如NanoDrop）：適用于DNA/RNA（260nm）和蛋白質(zhì)（280nm）的快速測(cè)定。
-熒光法（如Qubit）：適用于低濃度核酸檢測(cè)，靈敏度更高。
二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程
1.開(kāi)機(jī)與初始化
-打開(kāi)儀器，預(yù)熱5-10分鐘（部分設(shè)備需預(yù)熱更長(zhǎng)時(shí)間）。
-選擇對(duì)應(yīng)的檢測(cè)模式（核酸/蛋白質(zhì)）。
2.加樣與檢測(cè)
1.清潔檢測(cè)平臺(tái)：用無(wú)塵紙蘸取少量超純水或乙醇擦拭檢測(cè)表面，避免殘留污染。
2.加樣：
-NanoDrop類(lèi)儀器：滴加1-2µL樣品于檢測(cè)臺(tái)，放下檢測(cè)臂。
-比色皿型儀器：確保比色皿清潔，加入適量樣品（通常50-200µL）。
3.讀數(shù)：點(diǎn)擊“Measure”，記錄數(shù)據(jù)。
4.清潔：檢測(cè)完畢后，立即用超純水或乙醇清潔檢測(cè)臺(tái)，防止樣品結(jié)晶影響后續(xù)檢測(cè)。
3.數(shù)據(jù)記錄與分析
-核酸純度判斷：
-DNA：A260/A280≈1.8（純DNA），A260/A230>2.0（無(wú)污染物）。
-RNA：A260/A280≈2.0（純RNA）。
-若比值異常（如A260/A280<1.6），可能提示蛋白質(zhì)或酚類(lèi)污染。
-蛋白質(zhì)測(cè)定：使用Bradford或BCA法時(shí)，需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
三、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
1.檢測(cè)結(jié)果異常（如A260/A280比值偏低）
-可能原因：蛋白質(zhì)或有機(jī)溶劑污染。
-解決方案：重新純化樣品，或改用熒光定量法（如Qubit）。
2.儀器報(bào)錯(cuò)（如“Sampletooconcentrated”）
-可能原因：樣品濃度超出檢測(cè)范圍。
-解決方案：稀釋樣品后重新檢測(cè)。
3.基線(xiàn)漂移或不穩(wěn)定
-可能原因：檢測(cè)臺(tái)污染或光源老化。
-解決方案：清潔檢測(cè)臺(tái)，或聯(lián)系工程師校準(zhǔn)光源。
四、實(shí)用技巧
1.避免氣泡干擾：加樣時(shí)確保液滴完整，無(wú)氣泡，否則會(huì)導(dǎo)致吸光度波動(dòng)。
2.低濃度樣品檢測(cè)：
-使用熒光法定量（如Qubit），比紫外法更靈敏。
-若必須使用紫外法，可適當(dāng)增加樣品體積（如2µL→3µL）。
3.長(zhǎng)期存儲(chǔ)建議：
-每周至少開(kāi)機(jī)一次，防止光學(xué)元件受潮。
-存放于干燥、無(wú)塵環(huán)境中。
